产品描述

Sunitinib 是一种多靶点 RTK 抑制剂，以VEGFR2(Flk-1)和PDGFRβ为靶点，IC50为80 nM 和 2 nM，对c-Kit也有抑制作用。

靶点（IC50 & Targe）

c-Kit,

FLT3,

PDGFRβ,2nM

VEGFR2,80nM

体外研究

Sunitinib能够有效抑制Kit 和FLT-3。[1] Sunitinib是VEGFR2 (Flk1) 和 PDGFRβ有效的ATP竞争性抑制剂，Ki分别为9 nM 和8 nM，作用于VEGFR2和 PDGFR比作用于FGFR-1，EGFR，Cdk2，Met，IGFR-1，Abl，和src选择性高10倍多。在血清饥饿的表达VEGFR2 或PDGFRβ的NIH-3T3细胞中，Sunitinib抑制VEGF依赖性VEGFR2磷酸化和PDGF依赖性PDGFRβ磷酸化，IC50分别为10 nM和10 nM。对于过表达PDGFRβ或PDGFRα的NIH-3T3细胞，Sunitinib抑制VEGF对其诱导的增殖，IC50 分别为39 nM和69 nM。[2] Sunitinib抑制野生型FLT3，FLT3-ITD，和FLT3-Asp835磷酸化，IC50分别为250 nM，50 nM，和30 nM。Sunitinib抑制MV4;11 和OC1-AML5细胞的增殖，IC50分别为8 nM和14 nM，并以剂量依赖的方式诱导细胞凋亡。[3]

体内研究

与实质性，选择性抑制VEGFR2 或PDGFR在体内磷酸化与信号传导一致，Sunitinib (20-80 mg/kg/day)对各种肿瘤异种移植模型，包括HT-29，A431，Colo205，H-460，SF763T，C6，A375，或MDA-MB-435表现出广泛有效的剂量依赖性抗肿瘤活性。Sunitinib以80 mg/kg/day的剂量给药21天，导致8只小鼠中6只完全的肿瘤消退，并且在治疗结束后，110天的观察期内肿瘤不会再生。第二轮使用Sunitinib治疗依然能够有效抗肿瘤，但是不能完全恢复到第一轮治疗的情况。Sunitinib治疗导致肿瘤MVD显著下降，在SF763T神经胶质瘤中减少~40%。SU11248治疗导致表达荧光素酶的PC-3M异种移植物额外的肿瘤生长被完全抑制，尽管肿瘤大小没有减少。[2] 在FLT3-ITD 骨髓移植模型中，Sunitinib治疗(20 mg/kg/day)显著抑制皮下MV4;11 (FLT3-ITD)异种移植物的生长，并延长生存。[3]

激酶实验

生化酪氨酸激酶试验:

Sunitinib作用于VEGFR2 (Flk-1)和PDGFRβ的IC50值使用包含PKT完整胞浆区的谷胱甘肽-S-转移酶融合蛋白测定。生物化学的酪氨酸激酶试验，用来测定VEGFR2 (Flk-1)和PDGFRβ反式磷酸化活性，在多肽底物poly-Glu,Tyr (4:1)预涂层(在PBS中20 μg/well；4 °C下培养过夜)的96微孔板中进行。过量蛋白结合位点通过加入1-5% (w/v) BSA的PBS溶液阻断。纯化的GST融合蛋白在感染杆状病毒的昆虫细胞中产生。将GST-VEGFR2 和GST-PDGFRβ加入微孔板的2倍浓度激酶稀释缓冲液(由100 mM HEPES，50 mM NaCl，40 μM NaVO4，和0.02% (w/v) BSA组成)中。对GST-VEGFR2或GST-PDGFRβ的最终酶浓度为50 ng/mL。随后将25μL稀释的Sunitinib加入每个反应孔中以产生一系列适用于每个酶的抑制剂浓度。激酶反应通过加入不同浓度的ATP MnCl2溶液起始，使ATP浓度跨越酶的Km值，终MnCl2浓度为10 mM。板在室温下培养5-15分钟，然后加入EDTA停止反应。将板用TBST洗涤3次。在TBST(包含0.5% (w/v) BSA，0.025% (w/v)脱脂奶粉，和100 μM NaVO4)中以1:10,000稀释的兔子多克隆抗磷酸酪氨酸抗血清加入孔中，并在37℃下培养1小时。然后将板用TBST洗涤3次，接着加入山羊抗兔抗血清结合的辣根过氧化物酶(在TBST中以1:10,000 稀释)。板在37℃下培养1小时，然后用TBST清洗3次。加入2,2′-azino-di-[3-ethylbenzthiazoline sulfonate]作为底物后，测定每孔中的磷酸酪氨酸酶数量。

细胞实验

Cell lines: RS4;11，MV4;11，和 OC1-AML5

Concentrations: 溶解于DMSO，终浓度为~10 μM

Incubation Time: 24和48小时

Method: 加入Sunitinib和FL (50 ng/mL；仅FLT3-WT细胞)之前，细胞在包含0.1% FBS的培养基中饥饿过夜。培养48小时后，使用Alamar Blue法或台盼蓝细胞活性法测定增殖。加入Sunitinib 24小时后，通过蛋白免疫印迹法检测多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)的裂解或caspase-3水平，以测量细胞凋亡。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 皮下植入HT-29，A431，Colo205，H-460，SF763T，C6，A375，或MDA-MB-435的雌性nu/nu小鼠，和负荷表达荧光素酶的PC-3M肿瘤的雄性nu/nu小鼠。

Formulation: 以羧甲基纤维素悬浮液或柠檬酸盐缓冲溶液(pH 3.5)形成

Dosages: ~80 mg/kg

Administration: 口服，每天一次

(Only for Reference)

参考文献

[1] Sun L, et al. J Med Chem, 2003, 46(7), 1116-1119.

[2] Mendel DB, et al. Clin Cancer Res, 2003, 9(1), 327-337.

[3] O'Farrell AM, et al. Blood, 2003, 101(9), 3597-3605.

[4] Abrams TJ, et al. Mol Cancer Ther, 2003, 2(10), 1011-1021.

[5] Yee KW, et al. Blood, 2004, 104(13), 4202-4209.

[6] Ikezoe T, et al. Mol Cancer Ther, 2006, 5(10), 2522-2530.