产品描述

NVP-BEP800是一种新型的，全部人工合成的HSP90β抑制剂，IC50为58 nM，比作用于Hsp90家族成员Grp94和Trap-1选择性高70倍以上。

靶点（IC50 & Targe）

HSP90β,58nM

体外研究

NVP-BEP800是ATP竞争性的Hsp90β抑制剂，IC50为58 nM,作用于Hsp90家族成员Grp94和Trap-1，选择性高70倍，IC50分别为4.1 μM 和5.5 μM。Hsp70浓度为10 μM时， NVP-BEP800对 密切相关的GHKL ATP酶,拓扑异构酶 II和结构不相关的ATP酶抑制效果不大。NVP-BEP800有效抑制多种肿瘤细胞系增殖，GI50为从作用于A375细胞的38 nM到作用于PC3细胞的1.05 μM。NVP-BEP800作用于 A2058 和A549细胞，使用浓度为GI50的5倍，提高G2-M期百分数。用NVP-BEP800处理BT-474 细胞，引起Akt和ErbB2去磷酸化, ErbB2 降解,和Hsp70诱发，这种作用存在浓度依赖性，IC50分别为218 nM, 39.5 nM, 137 nM 和207 nM。[1]

体内研究

NVP-BEP800每天按15或 30 mg/kg剂量口服处理A375恶性黑色素移植瘤模型，持续15天，导致B-Raf和Akt磷酸化水平降低，这种作用存在剂量依赖性，且具有抗癌活性，每天按15和30 mg/kg剂量处理，则 T/C值分别为53% 和6%，每天按30 mg/kg处理则几乎抑制全部肿瘤。NVP-BEP800处理BT-474乳腺癌移植瘤, 提高Hsp90-p23复合体解离，且降低稳定态ErbB2,p-Akt和p-S6水平, 这种作用存在剂量依赖性，且具有显著抗癌活性，每天按30 mg/kg剂量处理则导致38%肿瘤衰退。每天按15 mg/kg剂量处理，则T/C为36%。[1]

激酶实验

竞争结合荧光偏振实验:

重组Hsp90β,TAMRA-radicicol, 或多种浓度NVP-BEP800加到实验buffer(50 mM TRIS pH 7.4, 5 mM MgCl2,150 mM KCl, 和0.1% CHAPS)中, 混合,在室温下温育30到45分钟，然后读数。根据共聚焦技术进行2D-FIDA-based HTS 实验，根据NVP-BEP800处理使高亲和配体TAMRA-radicicol从Hsp90β移位而检测降低的荧光偏振。根据竞争曲线测定IC50值。

细胞实验

Cell lines: A375, PC3, A2058, A549, HCT116, BT-474, SKBr3, MCF-7, MDAMB-157, MDA-MB-231, MDA-MB-468, 和BT20

Concentrations: 溶于DMSO，作为10 mM 的存储液，终浓度为1 mM

Incubation Time: 24小时

Method: 用NVP-BEP800处理细胞24小时，使用磺酰罗丹明B用于粘附细胞测定细胞增殖，或通过MTS实验用于悬浮细胞或低粘附性细胞测定细胞增殖。使用ToxiLight非破坏性细胞毒性生物测试试剂盒测定细胞死亡。通过RNase A/碘化丙啶染色，随后与70%乙醇混合，而测定细胞周期进展。使用同种caspase 活性试剂盒测定Caspase-3/7活性。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 皮下注射BT-474或A375细胞的雌性Harlan HsdNpa无胸腺裸鼠

Formulation: 在0.5%甲基纤维素中配制成悬浮液

Dosages: 50 mg/kg/day

Administration: 口服处理

(Only for Reference)

参考文献

[1] Massey AJ, et al. Mol Cancer Ther, 2010, 9(4), 906-919.