产品描述

M344是一种有效的HDAC抑制剂，IC50为100 nM，可以诱导细胞分化。

靶点（IC50 & Targe）

HDAC,100nM

体外研究

在MEL DS19细胞中，M344对细胞增殖比对细胞分化产生更显著的作用。M344在高于10 μM浓度时具有毒性，而最多只有20%的存活细胞群被诱导分化。[1]在体外，M344对子宫内膜癌细胞系Ishikawa和卵巢癌细胞系SK-OV-3表现出显著的抗增殖活性，EC50分别为2.3 μM 和5.1 μM。而正常的人子宫内膜上皮细胞对M344几乎不敏感。此外，M344也会导致细胞周期中S期细胞比例减少，G0/G1期细胞比例增加，诱导细胞凋亡，并降低线粒体的跨膜电位。[2] M344有效抑制胚胎神经元系统中肿瘤细胞，包括成神经管细胞瘤细胞(D341 Med, Daoy)和神经母细胞瘤细胞(CH-LA 90, SHSY-5Y )的增殖，GI50分别为0.65 μM，0.63 μM，0.63 μM 和 0.67 μM。[3]

激酶实验

酶抑制:放射性标记的小鸡核心组蛋白用作酶底物。酶使氚标记的乙酸从底物中释放，通过闪烁计数定量。IC50值根据三次测定的结果确定。50 μL玉米酶(30 °C)与10 μL [3H]乙酸盐-预标记的小鸡网状细胞组蛋白(1 mg/mL)培养30分钟。加入36 μL 1 M HCl/0.4 M 乙酸盐和800 μL乙酸乙酯停止反应。离心分离(10000g，5分钟)后，等份600 μL上层液体在3 mL液体闪烁混合液中计数放射性。M344以40 μM的起始浓度测试，活性物质进一步稀释。

细胞实验

Cell lines: MEL DS19 细胞

Concentrations: 0 到 50 μM

Incubation Time: 72小时

Method: MEL DS19细胞(小鼠红白血病细胞)维持在包含100 units/mL青霉素G钠盐和100 μg/mL硫酸链霉素的D-MEM中，用10%胎牛血清进行增补，在37 °C，5% CO2大气中进行培养。为测试M344诱导细胞分化的潜能，对数期细胞的群体倍增时间为11-13小时。连续稀释的M344在24孔板中使用1 mL D-MEM/孔制备。M344在DMSO中溶解，对照孔包含相同数量的溶剂(通常为2 μL/mL培养基)。随后，将细胞悬浮液加入孔中。72小时后，评估实验。细胞数量使用Casy 1 TTC流式细胞分析仪计数。处理细胞的增殖表示为溶剂对照组的增殖百分比。已分化的MEL细胞积累血红蛋白。因此，细胞分化的诱导根据文献通过联苯胺染色测定。将10 μL包含0.4%联苯胺溶液，和2% H2O2的12%乙酸加入100 μL细胞悬浮液。5分钟内，含有血红蛋白的细胞被染为蓝色。联苯胺阳性和阴性细胞在显微镜下用血细胞计数器计数，并计算阳性细胞的百分比。M344首先以10 μM和50 μM的终浓度测试。根据活性/毒性研究，选择一个浓度范围进行剂量响应分析。

(Only for Reference)

参考文献

[1] Jung M, et al. J Med Chem. 1999, 42(22), 4669-4679.

[2] Takai N, et al. Gynecol Oncol. 2006, 101(1), 108-113.

[3] Furchert SE, et al. Int J Cancer. 2007, 120(8), 1787-1794.

[4] St Germain C, et al. Cancer Cell Int. 2010,10, 32.