酶免技术常应用的酶有过氧化物酶和碱性磷酸酶,针对不同的酶,所作用的底物是不同的。过氧化物酶,通常来源于辣根,因此称为辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)。HRP具有分子量小、标记方法简单、性质稳定等优点,是临床检验试剂中一种常用的酶,被广泛用于生化检测项目及免疫类(ELISA)试剂盒。
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HRP发色底物
辣根过氧化物酶发色底物为过氧化物和供氢体(DH2),其真正底物是H2O2,人们往往习惯把供氢体称为底物或统称供氢体底物。在ELISA中常用的供氢体有以下几种:
1、OPD是ELISA技术中应用较多的供氢体,酶作用后显黄色(最大吸收波长为492 nm),灵敏度高,测定方便。
2、TMB是近年来常用的一种供氢底物,经酶作用后显天蓝色,目测对比度鲜明,加酸终止酶反应后变黄色(最大吸收波长为450 nm),易比色定量测定。
3、DAB供氢底物,其反应产物为不能溶解的棕色吩嗪衍生物,可用不同光镜观察。此种多聚物还能被还原和螯合四氯化碳,形成具有电子密度的产物,便于用电镜观察。
o-Phenylenediamine, OPD, 99.5%
邻苯二胺
反应产物:黄色、可溶
100g,500g
3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine, TMB, 99%
3,3',5,5'-四甲基联苯胺
反应产物:蓝色(黄色)、可溶
1g, 5g
3,3'-Diaminobenzidine, DAB, 99%
3,3'-二氨基联苯胺
反应产物:棕色、不溶
25g, 100g
Benzidine, 95%
联苯胺
反应产物:蓝色、不溶
25g, 250g
5-Aminosalicylic acid, 98.5%
5-氨基水杨酸
反应产物:棕色、可溶
25g, 100g, 500g
Azinobis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid-2NH4-salt, 98%
2,2'-二氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)铵盐
反应产物:绿色、可溶
1g
3-Amino-9-ethylcarbazole, 95%
3-氨基-9-乙基咔唑
反应产物:红色、可溶
5g, 25g
Chloro-1-naphthol, 97.5%
4-氯-1萘酚
反应产物:蓝色、可溶
25g
HRP的发光底物
鲁米诺(3-氨基邻苯二甲酰肼, Luminol)或其衍生物如异鲁米诺(4-氨基邻苯二甲酰肼,Isoluminol),是一类重要的发光试剂。用HRP标记抗体,进行免疫反应后,利用鲁米诺作为发光底物,在HRP和起动发光试剂(NaOH + H2O2)作用下,鲁米诺发光,发光强度依赖于酶免疫反应物中酶的浓度。反应过程如下图所示:
Luminol, 98%
鲁米诺
1g, 5g, 25g
Isoluminol, 98%
异鲁米诺
1g, 10g
4-Iodophenol, 99%
4-碘苯酚
5g, 25g, 100g
Sodium tetraphenylborate, 99.5%(ACS)
四苯基硼酸钠
25g, 100g, 500g
Bovine serum albumin [Fraction V], BSA
牛血清白蛋白
5g, 25g, 100g
Dodecyl sulfate sodium salt, SDS, 99%
十二烷基硫酸钠
100g, 500g
Sodium deoxycholate, 98%
去氧胆酸钠
25g, 100g, 500g
Phenylmethylsulfonyl fluoride, PMSF, 99%
苯甲基磺酰氟化物
25g, 100g
Leupeptin, 96.5%
亮抑酶肽
5mg, 25mg, 100mg
Tris(hydroxymethyl)aminomethane hydrochloride, Tris-HCl, 99%
三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐
5g, 25g, 100g, 500g
Polysorbate 80
吐温 80
25ml, 250mL, 1L