咖啡中赭曲霉毒素A的测定-百灵威

咖啡是现代社会中深受人们喜爱的饮品。咖啡豆种植、加工以及存储过程中易受到赭曲霉毒素A（OchratoxinA，OTA）的污染。如果长期饮用受OTA污染的咖啡，会对人体健康产生危害。

高效液相色谱结合免疫亲和柱检测OTA具有方法准确、回收率高、精密度好等优点。本方案建立了免疫亲和-高效液相色谱法测定咖啡豆中OTA含量的方法，试样提取后，通过免疫亲和柱净化，采用高效液相色谱仪结合荧光检测器测定。经验证，加标回收率90-100%，RSD值小于5%，满足测试要求。

称取咖啡粉5.0g（精确至0.01g）于50mL离心管（带盖）中，加入氯化钠1.0g，再加入20mL 80%甲醇水溶液，涡旋、振荡器振荡提取10min，8000r/min离心5.0min后上清液用滤纸过滤。取5.0mL提取滤液，加入20mL水，混匀待净化。

将免疫亲和柱连接于固相萃取装置上，将上述全部待净化稀释液过赭曲霉毒素免疫亲和柱，流速控制在1~2滴/秒。然后依次加入5.0mL PBS缓冲溶液和5.0mL一级水淋洗小柱，弃去全部流出液，压干。用1.0mL甲醇进行洗脱，关闭阀门浸泡30s，然后洗脱至进样小瓶中，供液相色谱测试。

不称取试样，按上述步骤进行实验。

色谱柱：C18-H液相色谱柱（4.6mm×250mm，5µm）
检测器：荧光检测器（激发波长333nm、发射波长460nm）
流动相：A：2%乙酸水 B：乙腈
流速：1mL/min
进样量：20µL
洗脱方式：等度洗脱，A：B=50：50

图1 校准点液相色谱图（2.5μg/L）

图2 咖啡豆中赭曲霉毒素A的液相色谱图（加标浓度10μg/kg）

表1 咖啡中赭曲霉毒素A加标回收实验结果

品名	分类	货号
Ochratoxin A, 98% 赭曲霉素	标准品	393813
Phosphate buffered saline, 10×, BioUltra, pH7.2-7.4 PBS 缓冲液	试剂	1914020
Acetic acid, 99.5%, for analysis 乙酸	试剂	991956
Methanol, 99.9%, LC-MS 甲醇	试剂	952707
Acetonitrile, 99.9%, LC-MS 乙腈	试剂	932537
Sodium chloride, 99.5%, for analysis 氯化钠	试剂	937240
赭曲霉毒素免疫亲和柱 , 1 ml	耗材	2660427
赭曲霉毒素免疫亲和柱 , 3 ml	耗材	933550
C18-H HPLC column, 250*4.6 mm 5 μm, 120 Å, PH 1.5-10.5 C18-H 液相色谱柱	耗材	1122769
样品瓶瓶盖 , 9 mm, 红色PTFE/白色硅胶隔垫, 蓝色螺口开口瓶盖	耗材	940292
短螺纹样品瓶 , 2ml, 9mm, 11.6×32mm, 棕色, 广口, 带书写签	耗材	902590
离心管, 50 mL	耗材	966183

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咖啡中赭曲霉毒素A的测定