毛地黄皂苷——甾醇沉淀、溶膜除垢的完美拍档-百灵威

毛地黄皂苷——甾醇沉淀、溶膜除垢的完美拍档

毛地黄皂苷是从紫花毛地黄的叶和种子中得到的一种配糖体。水解后,它能和具有游离3β-OH 的甾体类(例如胆甾醇)以等分子的比例形成难溶于水的分子化合物,因此被广泛利用来进行甾醇的定性和分离。同时,在生化研究领域,毛地黄皂苷也可作为免疫沉淀中常用的去污剂、溶解线粒体外膜试剂等

  • 严格质控,保证纯度HPLC≥50%
  • 可提供定制大包装服务,现货充足
cas:11024-24-1
Digitin, HPLC≥50%
毛地黄皂苷

技术说明

1. 甾醇沉淀反应

(1)羊毛醇中胆甾醇含量测定:精确称量约1g干燥羊毛醇,加温乙醇25mL溶解,过滤,残留物用50mL乙醇洗涤。冷却后,滤液中加乙醇至100mL,取此液10mL,加毛地黄皂苷/乙醇溶液(1/200)40mL,将此液加温至60℃后,室温放置18h。用已知质量的坩埚形玻璃过滤器将析出物滤出,残留物依次用乙醇15mL、丙酮15mL、热四氯化碳15mL洗涤,并在105℃干燥至恒重,按下式计算胆甾醇含量:胆甾醇含量(mg)= 析出物质量(g)× 241。

(2) 维生素D测定过程:将样品通过毛地黄皂苷柱子,利用甾醇与毛地黄皂苷生成沉淀而除去甾醇,洗脱液为乙醚/己烷(1/5),甾醇/毛地黄皂苷用量为1/14。

(3) 支原体毛地黄皂苷敏感性试验方法:用95%酒精配制1.5%毛地黄皂苷溶液,56℃水浴加热使其溶解,将此溶液浸湿灭菌的小圆滤纸,37℃使干燥,置于冰箱中保存使用。将待检支原体菌液涂种于固体培养基上,将上述毛地黄皂苷纸片放于接种培养基上,培养3-5d后,低倍镜下观察菌落生长情况,若有抑制带出现,带宽>2mm的为支原体,带宽<2mm为无甾醇原体。

2. 溶膜除垢

(1)有些巨噬细胞、肥大细胞、淋巴细胞等在常用的电泳缓冲液中难以溶膜,毛地黄皂苷可与该细胞膜上的胆固醇作用,使细胞膜穿孔、溶解。穿孔后蛋白质等大分子的活性部分伸到细胞外, 与荧光标记的相应抗体结合, 通过毛细管电泳, 单个细胞表面的荧光强度可被激光检测, 从而可反映单个细胞内某蛋白分子的含量。

(2)细胞凋亡的检测中,凋亡检测采用APO 2.7标记法,取1 × 106个细胞,加入毛地黄皂苷100μL,冰浴20min,用冷的PBS洗一遍,加20μL APO 2.7PE,震荡、混匀,室温避光15min,用PBS再洗一遍,弃上清,重悬,避光至上机检测[1]

取处理后的2种肿瘤细胞每毫升106个,用PBS清洗2次,移入已硅化的玻璃管。于室温下加入100g/mL的毛地黄苷100μL后,加藻红素标记的APO 2.7单抗(APO 2.7PE-CY5),于流式细胞仪(EPISC XL, Coulter)上进行荧光检测,并给出相应的凋亡细胞百分率[2]

  1. 贾京锦等. 疑难病杂质.2006, 5(4).
  2. 中国农业科学 2004, 37(9): 1379 - 1384.