毛地黄皂苷——甾醇沉淀、溶膜除垢的完美拍档

毛地黄皂苷是从紫花毛地黄的叶和种子中得到的一种配糖体。水解后，它能和具有游离3β-OH 的甾体类（例如胆甾醇）以等分子的比例形成难溶于水的分子化合物，因此被广泛利用来进行甾醇的定性和分离。同时，在生化研究领域，毛地黄皂苷也可作为免疫沉淀中常用的去污剂、溶解线粒体外膜试剂等。

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产品编号：963794

cas：11024-24-1
Digitin, HPLC≥50%
毛地黄皂苷

技术说明

1. 甾醇沉淀反应

（1）羊毛醇中胆甾醇含量测定：精确称量约1g干燥羊毛醇，加温乙醇25mL溶解，过滤，残留物用50mL乙醇洗涤。冷却后，滤液中加乙醇至100mL，取此液10mL，加毛地黄皂苷/乙醇溶液（1/200）40mL，将此液加温至60℃后，室温放置18h。用已知质量的坩埚形玻璃过滤器将析出物滤出，残留物依次用乙醇15mL、丙酮15mL、热四氯化碳15mL洗涤，并在105℃干燥至恒重，按下式计算胆甾醇含量：胆甾醇含量（mg）= 析出物质量（g）× 241。

（2）维生素D测定过程：将样品通过毛地黄皂苷柱子，利用甾醇与毛地黄皂苷生成沉淀而除去甾醇，洗脱液为乙醚/己烷（1/5），甾醇/毛地黄皂苷用量为1/14。

（3）支原体毛地黄皂苷敏感性试验方法：用95%酒精配制1.5%毛地黄皂苷溶液，56℃水浴加热使其溶解，将此溶液浸湿灭菌的小圆滤纸，37℃使干燥，置于冰箱中保存使用。将待检支原体菌液涂种于固体培养基上，将上述毛地黄皂苷纸片放于接种培养基上，培养3-5d后，低倍镜下观察菌落生长情况，若有抑制带出现，带宽>2mm的为支原体，带宽<2mm为无甾醇原体。

2. 溶膜除垢

（1）有些巨噬细胞、肥大细胞、淋巴细胞等在常用的电泳缓冲液中难以溶膜，毛地黄皂苷可与该细胞膜上的胆固醇作用，使细胞膜穿孔、溶解。穿孔后蛋白质等大分子的活性部分伸到细胞外, 与荧光标记的相应抗体结合, 通过毛细管电泳, 单个细胞表面的荧光强度可被激光检测, 从而可反映单个细胞内某蛋白分子的含量。

（2）细胞凋亡的检测中，凋亡检测采用APO 2.7标记法，取1 × 106个细胞，加入毛地黄皂苷100μL，冰浴20min，用冷的PBS洗一遍，加20μL APO 2.7PE，震荡、混匀，室温避光15min，用PBS再洗一遍，弃上清，重悬，避光至上机检测^[1]。

取处理后的2种肿瘤细胞每毫升106个，用PBS清洗2次，移入已硅化的玻璃管。于室温下加入100g/mL的毛地黄苷100μL后，加藻红素标记的APO 2.7单抗（APO 2.7PE-CY5），于流式细胞仪（EPISC XL, Coulter）上进行荧光检测，并给出相应的凋亡细胞百分率^[2]。