生化常用培养基及相关试剂的配制

肉汤培养基
  • 蛋白胨10g、氯化钠5g、牛肉汤3g加至1000mL去离子水中;
  • 将上述成分混合,微热溶解后放至室温,调整pH值至7.4-7.6,滤清;
  • 分装,116℃灭菌30分钟,灭菌后培养基的pH值应为7.2-7.4。
LB(Luria-Bertani)培养液
  • 配制每升LB培养液,应在950mL去离子水中加入:酵母提取物5g、胰蛋白胨10g、NaCl 10g;
  • 摇动烧瓶直至溶质完全溶解;
  • 用5mol/L NaOH(约0.2mL)调节pH值至7.0;
  • 加入去离子水至总体积为1L,高温高压蒸汽灭菌 20min。
LB 琼脂平板
  • 先按LB培养液配制液体培养基;
  • 高压灭菌前加入琼脂糖 15g /L,高压蒸汽灭菌 20min;
  • 从高压灭菌器中取出培养基,轻轻旋动,以使溶解的琼脂糖能均匀分布;
  • 培养基冷却至50℃时,加入抗生素等不耐热的试剂。
注意:为避免产生气泡,混匀培养基时应采取旋动的方式,直接从烧瓶中倾出培养基铺制平板。90mm直径的培养皿约需30-50mL培养基,培养基完全凝结后,应倒置平皿并贮存于4℃备用。
M9培养基
  • M9母液:在1L烧杯中加入450mL蒸馏水和NH4Cl 5g、Na2HPO4 64g、KH2PO4 15g、NaCl 2.5g将其溶解于水中,加1L水灭菌。
  • 取M9母液200mL加水700mL,加2mL 1mol/L已灭菌的硫酸镁,加100 uL已灭菌的1mol/L氯化钙(可加可不加)。
注意:硫酸镁和M9母液要分开灭菌,否则会有沉淀。
高氏1号培养基
  • 组分:可溶性淀粉20g、KNO3 1g、K2HPO4 0.5g、MgSO4· 7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、FeSO4·7H2O 0.01g、琼脂20g。
  • 配制时,先用少量冷水,将淀粉调成糊状,倒入少于所需水量的沸水中,在火上加热,边搅拌边依次逐一溶化其他成分,溶化后,补足水分到1L,调pH,121℃灭菌20min。
  • 高温灭菌后,倒平皿前,加入2滴10%酚至1L培养基中混匀,将培养基倒入平皿内约15mL/皿。
IPTG
  • 在8mL蒸馏水中溶解2g IPTG(异丙基 β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷)后,用蒸馏水定容至10mL;
  • 用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1mL小份贮存于-20℃。
X–gal
  • 用二基甲酰胺(DMF)溶解X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚基 β-D-吡喃半乳糖苷)配制成20mg/mL的贮存液,-20℃避光保存。

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