碱性磷酸酶(Alkaline phospharase, ALP)与骨骼、肝脏等人类疾病的发生有关,是体外诊断试剂中常用的标记酶之一。ALP测定方法主要是比色法和连续监测法。
其中比色法检测中常用的ALP底物是pNPP(4-硝基苯磷酸二钠盐六水合物),当ALP与pNPP反应后,形成黄色水溶性反应产物,在λ =405 nm有光吸收。其反应灵敏,颜色鲜明,因此在体外诊断试剂盒研发生产中得到广泛应用。
BCIP+NBT是ALP理想的发色底物组合之一,BCIP(5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸酯对甲苯胺盐)在ALP的催化下产生强反应性产物,该产物又与NBT(氯化硝基四氮唑兰)发生反应,形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan,从而达到标记作用。