DNA PAGE电泳全解析:精准分离小片段DNA

时间: 2025-08-04
作者: 百灵威
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聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是分离小片段DNA(<1 kb)的金标准技术,分辨率可达1 bp,远超琼脂糖凝胶。其核心在于丙烯酰胺与交联剂形成的三维网状结构,通过调整两者比例(如19:1、29:1)控制凝胶孔径,适配不同片段大小(10 bp~1 kb)。TBE缓冲液(含硼酸)提供稳定pH环境,而过硫酸铵(APS)和TEMED催化凝胶聚合。上样时需加入含甘油与指示染料的Loading Buffer,电泳后通过高灵敏染料或银染显影。

PAGE尤其适用于PCR产物鉴定、测序分析及寡核苷酸纯化。变性PAGE(含尿素)可消除DNA二级结构干扰,常用于测序胶;非变性PAGE则保留天然构象。实验需注意凝胶聚合时间(30~60分钟)、电压控制(5~15 V/cm)及染色方法选择。该技术兼具高分辨率与灵活性,是分子克隆和基因组研究的必备工具。
凝胶制备试剂
丙烯酰胺单体溶液
品名 CAS 货号
Acrylamide, 99%, Electrophoresis Grade
丙烯酰胺
79-06-1 911990
危化品
N,N'-Methylenebisacrylamide, 99%, Electrophoresis Grade
N,N'-亚甲基双丙烯酰胺
110-26-9 977281
缓冲系统
品名 CAS 货号
Tris boric acid electrophoresis buffer (10×TBE)
Tris-硼酸电泳缓冲液(10×TBE)
/ 9456174
Urea, 99%
尿素
57-13-6 905892
SDS-PAGE Protein Loading Buffer , 5×, Denaturing, Non-Reducing
SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液
/ 9456323
PAGE gel coagulant
PAGE胶促凝剂
/ 9456141
催化剂与聚合试剂
品名 CAS 货号
Ammonium persulfate, 98%, for analysis
过硫酸铵
7727-54-0 173322
危化品
N,N,N',N'-Tetramethylethylenediamine, 99%
N,N,N',N'-四甲基乙二胺
110-18-9 255989
危化品
电泳与上样试剂
电泳缓冲液
品名 CAS 货号
Tris boric acid electrophoresis buffer (5×TBE)
Tris-硼酸电泳缓冲液(5×TBE)
/ 9456173
上样缓冲液
品名 CAS 货号
Xylene cyanol FF
二甲苯青FF
2650-17-1 358458
Bromophenol Blue, for analysis, Indicator
溴酚蓝
115-39-9 978967
Glycerol, 99%
甘油
56-81-5 262536
Formamide, 99%
甲酰胺
75-12-7 943838
DNA Marker, Band:100, 250, 500, 750, 1000, 2000 bp
DNA分子量标准
/ 994220
染色与显影试剂
品名 CAS 货号
Acetic acid, 99.8%
乙酸
64-19-7 531036
危化品
Formaldehyde, 37% solution in H2O, stabilized with MeOH
甲醛
50-00-0 226396
危化品
相关耗材
品名 CAS 货号
Pipette tips, 10 μL, clear, 1000 tips/pack
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/ 920067
Single-channel mechanical pipettor, Volume range: 0.1-2.5μL, Increment: 0.05μL
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/ 991313
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