Beads Magrose Heparin磁珠表面所偶联的肝素带有大量负电性硫酸根离子基团,在一定pH值下,可与带正电的蛋白具有强结合能力,同时肝素能通过特异性亲和与生长因子及抗凝血酶AT Ⅲ结合,因此,可通过磁性分离的方式快速、高效地从血浆中一步纯化出目标因子。
产品优势
1、丰富的结合位点,加强了与配体的特异性结合;
2、磁响应速度快,减少操作时间;
3、磁珠具有良好的分散性和重悬性,提高操作的便捷性;
4、配基具有良好的物理化学稳定性,提高了实验结果的可靠性及可重复性。
与传统柱层析纯化方式相比,Magrose Heparin磁珠无需对粗蛋白样品进行预处理(如:反复繁琐的离心,费时费力的过滤操作);无需控制流速及柱压,不需要昂贵的层析设备;在很短时间内就能完成高纯度目的蛋白的提取,且能轻松实现多个样品的平行处理,实现高通量的蛋白纯化。
此磁珠可应用于抗凝血因子III、凝血因子、干扰素、核酸结合蛋白、脂蛋白、蛋白合成因子、限制性内切酶、凝血酶及类凝血酶等生物分子的分离纯化。
产品特性
| 货号 | 9298209 |
| 产品名称 | 肝素磁珠 , 10%(v/v), 30-150μm Beads MagroseHeparin, 10%(v/v), 30-150μm |
| 磁珠粒径范围 | 30~150μm |
| 表面基团/含量 | 肝素(~3mg/mL beads) |
| 蛋白结合量 | 可达2mg/mL(100% beads) |
| 悬液浓度 | 20%(v/v)乙醇 |
| 保存温度 | 2℃~8℃ |
操作流程
1. 样品处理:取人血浆 1 mL 加入至 1.5 mL EP 管中,接着加入 500 µL Binding Buffer,充分混匀。
2. 磁珠预处理:将 Magrose Heparin 磁珠漩涡振荡 30 s,使磁珠充分重悬;取 1 mL 10%(V/V)磁珠悬液置于另一新的 1.5 mL EP 管中。对磁珠悬液进行磁性分离,弃上清液,用 1 mL Binding Buffer 洗涤 2 次,磁性分离,管中磁珠可直接用于抗体分离。
3. 蛋白吸附:在步骤 2 预处理的磁珠管中加入步骤 1 处理的样品溶液,漩涡振荡均匀,在室温下(约 25°C)将 EP 管置于垂直混合仪混匀 15~30 min,使样品和磁珠充分接触并吸附,然后进行磁性分离, 移弃上清液。
4. 磁珠洗涤:向 EP 管中加入 1 mL Binding Buffer,漩涡振荡重悬磁珠 1 min 后进行磁性分离,移弃上清液;该操作重复 3 次。
注意事项:根据对洗脱蛋白 SDS-PAGE 图谱,在 Binding Buffer 中可适当加入一定浓度 NaCl,该步骤可有效的去除非特异性吸附蛋白,使操作者获得更高浓度的目标蛋白。
5. 蛋白洗脱:在上述完成磁珠洗涤的 EP 管中加入 0.2 mL Elution Buffer,用移液器吹打或者涡旋振荡下迅速重悬,然后在室温下(约 25°C)将 EP 管置于垂直混合仪混匀10~15 min 后进行磁性分离,收集上清液至新的 EP 管。
6. 磁珠再生:向 EP 管中加入 1 mL 纯化水,漩涡振荡重悬磁珠后进行磁性分离,移弃上清液,重复操作 3 次;接着改用 Binding Buffer 洗涤磁珠 3 次。磁珠多次使用后会有沉淀蛋白、强疏水性蛋白、脂蛋白等杂质非特异性吸附到磁珠上,为了保证磁珠的使用效率,建议进行在位清洗(CIP)。
7. 在位清洗(CIP):依次采用 0.1 M NaOH、8 M 尿素、纯化水、Binding Bufdfer 洗涤磁珠 2 次;最后 加入 1 mL Storage Buffer(20%乙醇)重悬磁珠 ,置于 2~8°C 保存。
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