食品中11种合成着色剂的固相萃取方法-百灵威

着色剂具有改善食品色泽、增进食欲的作用，因其成本低、色泽鲜艳、着色力强、稳定性好等特点，在食品生产加工行业中被广泛应用。但食用合成着色剂常以苯、甲醛等化工产品为原料，经磺化、卤化等化合而成，易混入有毒有害物质，有潜在的毒性和致癌性。各国对食品中合成着色剂的使用范围和使用限量都有严格的规定，GB2760—2014《食品添加剂使用卫生标准》明确严格规定了合成色素的使用限量和范围。

本方案以WAX 固相萃取小柱为净化柱，本方案开发了不同样品基质中合成着色剂测定的固相萃取方法，方法操作简便，回收率高，满足检测要求。

样品前处理

一、样品提取

1.液体及部分固体试样（饮料类、果冻等）
称取试样2g于50mL离心管中，加入25mL乙醇氨水溶液，涡旋1min，50℃超声提取15min，8000转/分钟离心5min，取上清液置于50mL离心管中，加入15mL乙醇氨水溶液重复提取1次，离心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50mL，混匀后得提取液。准确吸取提取液10mL，50℃下氮气浓缩至2mL左右，加入10mL 5%甲醇水溶液溶解，混匀作为待净化液。
2.含油量较大的试样（糕点、酱卤肉、薯片等）
称取试样2g于50mL离心管中，加入20mL石油醚，涡旋1min，涡旋振摇10min，以8000转/分钟离心5min，弃去上清液，除尽石油醚溶剂，加入25mL乙醇氨水溶液至除油试样中，涡旋1min，50℃超声提取15min，8000转/分钟离心5min，取上清液置于50mL离心管中，加入15mL乙醇氨水溶液重复提取1次，离心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50mL，混匀后得提取液。准确吸取提取液10mL，50℃下氮气浓缩至2mL左右，加入10mL 5%甲醇水溶液溶解，混匀作为待净化液。

二、样品净化（WAX 固相萃取小柱942253，150mg/6ml）

活化：依次用6mL甲醇和6mL水活化；
上样：将上述待净化液过柱，弃掉流出液；
淋洗：依次用6mL水和6mL甲醇淋洗，抽干小柱；
洗脱：6mL 2%氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，于45℃氮吹仪浓缩至0.3mL左右，加入乙酸铵溶液（pH=9.0）复溶至2mL，涡旋混匀，过PTFE滤膜，上机分析检测。

分析检测

一、液相色谱条件

色谱柱：C18-H液相色谱柱（4.6mm×250mm，5µm）
流动相：A：0.02mol/L乙酸铵溶液 B：甲醇
流速：1.0mL/min
柱温：30℃
进样量：10µL
检测器：紫外检测器
检测器波长范围：400~800nm，柠檬黄、喹啉黄的测定波长为415nm；新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红、赤藓红的测定波长为520nm；亮蓝、靛蓝的测定波长为630nm。
洗脱方式：梯度洗脱，见表1

表1：梯度洗脱程序表

二、检测结果

图1 5.0mg/kg添加水平下标准溶液中11种着色剂色谱图

图2 5.0mg/kg添加水平下果冻中11种着色剂色谱图

图3 5.0mg/kg添加水平下饮料中11种着色剂色谱图

图4 5.0mg/kg添加水平下蛋糕中11种着色剂色谱图

图5 5.0mg/kg添加水平下酱卤鸭翅根中11种着色剂色谱图

图6 5.0mg/kg添加水平下薯片中11种着色剂色谱图

表2：加标水平回收结果

标准品

品名	CAS	货号
Amaranth 苋菜红	915-67-3	DRE-C10148500
FD & C Red 40 诱惑红AC	25956-17-6	DYE-056N-R1
FD & C Blue 1 FD&C 蓝色 1	3844-45-9	DYE-062N-R1
New Red 新红	220658-76-4	DRE-C15506000
Ponceau 4RC (E124) 胭脂红	2611-82-7	DRE-C16284000
Sunset yellow, 98% 日落黄	2783-94-0	919814
Tartrazine solution, 500 μg/mL in water 柠檬黄标准溶液	1934-21-0	925845
Indigo, 98% 靛蓝	482-89-3	991700
Quinoline Yellow 喹啉黄(E104)	8004-92-0	DRE-C16709700
Azorubin, for identification 偶氮玉红	3567-69-9	994241
FD & C Red 3; 赤藓红	16423-68-0	DYE-057N-R1

耗材

品名	货号
C18-H HPLC column, 250*4.6 mm 5 μm, 120 Å, PH 1.5-10.5 C18-H 液相色谱柱	1122769
Centrifuge tubes, 50 mL, vertical, with scale, conical bottom, 40 tubes/pack 离心管	966183
WAX 固相萃取小柱 , 填料150 mg, 柱体积6 ml, 30 支/盒	942253
WAX 固相萃取小柱 , 填料60 mg, 柱体积3 ml, 50 支/盒	950784
WAX 固相萃取小柱 , 填料500 mg, 柱体积6 ml, 30 支/盒	940901

试剂

品名	CAS	货号
Methanol, 99.9%, LC-MS 甲醇	67-56-1	952707
Ammonium acetate, 98%, for analysis 乙酸铵	631-61-8	925211
Ammonium hydroxide, for analysis, 25-28% 氢氧化铵	1336-21-6	921637
Petroleum ether, for analysis, bp 60-90 °C 石油醚	8032-32-4	995014
Ethanol, 99.7%, for analysis 乙醇	64-17-5	921327

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