豆芽中4种植物生长素的UPLC/MS/MS测定-百灵威

根据《国家食品药品监督管理总局农业部国家卫生和计划生育委员会关于豆芽生产过程中禁止使用6-苄基腺嘌呤等物质的公告（2015年第11号）》：6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸钠、赤霉素等物质作为低毒农药登记管理并限定了使用范围，豆芽生产不在可使用范围之列。

百灵威建立了采用QuEChERS方法进行样品前处理，UPLC/MS/MS 法测定豆芽中4种植物生长素的检测方案。该方法的加标回收率在70-120%之间，RSD小于5%，能够作为豆芽中生长素检测的参考方法。

样品前处理

一、样品提取

准确称取10.0g经粉碎的豆芽置于50mL离心管中，加入20mL含1%甲酸乙腈溶液，2500rpm涡旋混匀5min；然后加入QuEChERS萃取盐包（2579433），立即手动振摇30s，涡旋2min；再以5000r/min离心5min，使乙腈和水分层，上层乙腈层待净化。

二、样品净化

精密量取上层乙腈层5mL置于QuEChERS15mL净化管（921852）中，2500rpm涡旋混匀2min，以5000r/min离心5min，移取上层清液4mL于另一15mL离心管中，45℃水浴氮吹至干，用甲醇定容至1mL，过0.22µm尼龙滤膜供上机测试。

三、标准曲线配置

称取空白豆芽样品10.0g按照上述一、二步骤操作，作为空白基质提取液；分别精密量取一定量的混合标准液加入到空白基质提取液中，用甲醇定容至1mL，配制成适当浓度的基质混合标准工作溶液。

分析检测

一、液相色谱条件

色谱柱：C18柱 (2.1mm×50mm,1.8µm)
流动相：A：5mmol/L乙酸铵 B：0.1%甲酸的甲醇溶液
流速：0.3mL/min
柱温：35℃
进样量：5µL
洗脱方式：梯度洗脱，见表1

表1：梯度洗脱程序表

二、质谱条件

离子源：HESI
电喷雾电压：3500V
鞘气压力：35arb
辅气压力：3arb
离子传输管：380℃
辅气温度：420℃
组分、保留时间及特征离子对照表见表2

表2：组分、保留时间、特征离子对照表（*为定量离子）

三、检测结果

图1 豆芽中植物生长激素检测色谱图从上至下出峰顺序依次为：4-氯苯氧乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸、6-苄基腺嘌呤、赤霉素

表3 豆芽中4种植物生长激素加标回收结果（25.0 µg/kg）

注意事项

1.该实验采用UPLC/MS/MS检测，对部分目标物有基质抑制效应，如6-苄基腺嘌呤，建议配制基质混合标准工作液进行定量，校正回收率。
2.在标准《BJS201703》中，只取4mL提取液进行净化，离心后取全部净化液氮吹复溶，但在实际操作中，离心后实际氮吹复溶的净化液体积不到4mL，会造成检测结果偏低，建议取5mL提取液净化，再精密量取4mL净化液氮吹复溶。

产品列表

品名	分类	货号
6-Benzylaminopurine, 99% 6-苄基腺嘌呤	标准品	C22641
Gibberellic acid;1000 μg/mL in Methanol 赤霉素酸，1000μg/mL甲醇溶液	标准品	P-906S-10X
4-CPA ;100 μg/mL in MeOH 4-氯苯氧乙酸（标准品）	标准品	P-373S
Acetonitrile, 99.9%, LC-MS 乙腈	试剂	932537
Formic acid, 98%, for LC-MS 甲酸	试剂	942988
Methanol, 99.9%, LC-MS 甲醇	试剂	952707
Ammonium acetate, 98%, for analysis 乙酸铵	试剂	925211
PSA/C18净化管 NY/T方法 , 15ml(建议样品处理量2ml); 100 mg PSA, 100 mg C18, 300 mg 无水硫酸镁, 50支	耗材	921852
乙酸钠提取管 AOAC NY/T方法 , 50 ml; 6 g 无水硫酸镁, 1.5 g 乙酸钠, 50 支/盒	耗材	2579433
有机系尼龙66 针式过滤器	耗材	9215892
样品瓶瓶盖 , 9 mm, 红色PTFE/白色硅胶隔垫, 蓝色螺口开口瓶盖	耗材	940292
短螺纹样品瓶 , 2ml, 9mm, 11.6×32mm, 棕色, 广口, 带书写签	耗材	902590

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