食品中7种合成着色剂检测的固相萃取方法-百灵威

合成着色剂又称合成色素，常以苯、甲苯、萘等化工产品为原料，经过磺化、偶合、缩合、偶氮化等一系列有机反应制备而成。合成着色剂由于成本低廉、色泽鲜艳，着色力强，色调多样，故被广泛应用；但它具有一定的毒性（如致泻性、致癌性等），过量摄入会危害人体健康。因此，国家对合成着色剂的使用严格控制了范围和最大限量值。

本方案以聚酰胺小柱为净化柱，通过高效液相色谱法测定食品中柠檬黄、日落黄、新红、胭脂红、苋菜红、诱惑红和亮蓝7种合成着色剂。方法操作简单，灵敏度高，能够满足日常检测需求。

样品前处理

一、样品提取

1.果蔬饮料提取
称取试样2.0g（精确至0.001g）于50mL离心管中，加入25mL乙醇氨水溶液（乙醇700mL，氨水4mL，用水定容至1L），涡旋5min，50℃超声提取15min，8000转/分钟离心5min，取上清液置于50mL离心管中，加入15mL乙醇氨水溶液重复提取1次，离心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50mL，混匀后得提取液。准确吸取提取液10mL，50℃下氮气浓缩至2mL左右，加入10mL5%甲醇水溶液溶解，混匀作为待净化液，用20%柠檬酸溶液调节溶液pH=3~4，待上样。
2.火腿、薯片、面包和卤鸡翅试样提取
称取试样2g于50mL离心管中，加入25mL乙醇氨水溶液至试样中，涡旋5min，50℃超声提取5min，8000转/分钟离心5min，取上清液置于50mL离心管中，加入15mL乙醇氨水重复提取一次，离心后合并上清液，乙醇氨水溶液定容至50mL，混匀后得提取液。准确吸取提取液10mL，50℃下氮气浓缩至2mL左右，加入10mL5%甲醇水溶液溶解，混匀作为待净化液，用20%柠檬酸溶液调节溶液pH=3~4，待上样。

二、样品净化（聚酰胺小柱996580，1g/6ml）

活化：依次用6mL甲醇和6mL水活化；
上样：将上述待净化液过柱，弃掉流出液；
淋洗：依次用5mL水和5mL甲醇淋洗，抽干小柱；
洗脱：7mL5%氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，于45℃氮吹仪浓缩至0.3mL左右，加入0.02mmol/L乙酸铵溶液（pH=9.0）复溶至2mL，涡旋混匀，过PTFE滤膜，上机。

分析检测

一、液相色谱条件

色谱柱：C18-H液相色谱柱（4.6mm×250mm，5µm）
流动相：A：0.02mol/L乙酸铵溶液 B：甲醇
流速：1.0mL/min
柱温：30℃
进样量：10µL
检测器：紫外检测器
洗脱方式：梯度洗脱，见表1

表1：梯度洗脱程序表

二、检测结果

图1 饮料添加水平（5.0 mg/kg）中7种着色剂色谱图

图2 面包添加水平（5.0 mg/kg）中7种着色剂色谱图

图3 酱卤鸡翅根添加水平（5.0 mg/kg）中7种着色剂色谱图

图4 火腿添加水平（5.0 mg/kg）中7种着色剂色谱图

图5 薯片添加水平（5.0 mg/kg）中7种着色剂色谱图

表2：加标水平回收结果

标准品

品名	CAS	货号
Amaranth 苋菜红	915-67-3	DRE-C10148500
FD & C Red 40 诱惑红AC	25956-17-6	DYE-056N-R1
FD & C Blue 1 FD&C 蓝色 1	3844-45-9	DYE-062N-R1
New Red 新红	220658-76-4	DRE-C15506000
Ponceau 4RC (E124) 胭脂红	2611-82-7	DRE-C16284000
Sunset yellow, 98% 日落黄	2783-94-0	919814
Tartrazine solution, 500 μg/mL in water 柠檬黄标准溶液	1934-21-0	925845

耗材

品名	货号
C18-H HPLC column, 250*4.6 mm 5 μm, 120 Å, PH 1.5-10.5 C18-H 液相色谱柱	1122769
Centrifuge tubes, 50 mL, vertical, with scale, conical bottom, 40 tubes/pack 离心管	966183
Polyamide cartridges, 1 g/12 ml, 20 pcs/pack 聚酰胺小柱	936080
Polyamide cartridges, 1 g/6 ml, 30 pcs/pack 聚酰胺小柱	996580
Polyamide cartridges, 2 g/12 ml, 20 pcs/pack 聚酰胺小柱	997025

试剂

品名	CAS	货号
Methanol, 99.9%, LC-MS 甲醇	67-56-1	952707
Ammonium acetate, 98%, for analysis 乙酸铵	631-61-8	925211
Ammonium hydroxide, for analysis, 25-28% 氢氧化铵	1336-21-6	921637
Citric acid, 98%, anhydrous 柠檬酸	77-92-9	947677
Ethanol, 99.7%, for analysis 乙醇	64-17-5	921327

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