《2022年版食品安全监督抽检实施细则》更新了针对于牛、羊、猪、鸡的肌肉、及肝、肾组织中部分四环素类、磺胺类和喹诺酮类的检测方法——《GB 31658.17-2021 动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，参照该标准，百灵威对部分参数进行了优化，建立了一份具有良好回收率及稳定性、能满足国标要求的SPE-HPLC-MS/MS 方法。

优化Tips：

1. 在提取过程中降低离心的温度至-5℃可以更好的抑制样品中的脂肪在水溶液表面的分散，有利于样品的提取转移。
2. 在超声提取完合并两次的提取液之后，再进行一次离心，更好的去除基质的影响，便于上样过柱。
3. 在淋洗过程中使用5 mL 5%甲醇-水溶液淋洗液，可以减少在淋洗过程中部分目标物的损失。
4. 标准中氮吹至100 μL左右，不氮吹干可以减少在氮吹过程中部分目标化合物的损失。
5. 复溶时，加入0.1%甲酸溶液定容至1 mL,可以有效的改善部分目标化合物的峰型，同时提高部分化合物的回收率。

具体操作方法及结果见下文。

一、样品提取

准确称取粉碎均匀的肉类样品1 g（精确至0.01 g）于干净离心管中，加入8 mL Mcllvaine-Na2EDTA 溶液，涡旋混匀后超声提取20 min，-5℃下120000 r/min 离心5 min，取出上清液于另一干净离心管，试样残渣加入8 mL 磷酸盐缓冲液，同上述操作，合并两次提取液，-5℃下120000 r/min 离心5 min，上清液待净化。

Mcllvaine-Na2EDTA 缓冲液：取柠檬酸·一水12.9 g、磷酸氢二钠·十二水10.9 g、乙二胺四乙酸二钠·二水39.2 g，加水900 mL，用1 mol/L 的氢氧化钠溶液调节pH至5.0±0.2，用水稀释至1000 mL。

磷酸盐缓冲液：取0.05 mol/L 磷酸二氢钠溶液190 mL，用0.05 mol/L 磷酸氢二钠溶液稀释至1000mL。

二、样品净化（HLB，200mg/6mL）

活化：固相萃取柱依次用5 mL甲醇和5 mL水活化。

上样：取上述待净化液加入活化好的固相萃取柱中。

淋洗：依次用5 mL 水，5 mL 5%甲醇-水溶液，抽干。

洗脱：用8 mL（甲醇:乙酸乙酯:氨水=50:50:2）溶液进行洗脱。

收集全部洗脱液，45℃下氮吹至100 μL 左右，加入0.1%甲酸溶液定容至1 mL，过PTFE亲水滤膜，上机测试。

三、基质标准曲线溶液的制备

取6个空白基质样品同正常样品一样操作，收集洗脱液后，于洗脱液中分别加入适量标液，再与其他样品洗脱液一同氮吹，定容，使最终上机溶液的浓度分别为2 μg/L、10 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、500 μg/L。

四、仪器条件

色谱条件

仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TSQ Endura）
色谱柱：Hypersil GOLD C18 (2.1 mm×100 mm，1.9 μm)
流动相：A：水（0.1 %甲酸） B：甲醇:乙腈=2:8（0.1 %甲酸）
洗脱方式：梯度洗脱，见表1
流速：0.3 mL/min
柱温：35℃
进样量：10 μL

表1 梯度洗脱程序

质谱条件

离子源：HESI
电喷雾电压：3500 V
鞘气压力：40 arb
辅气压力：2 arb
离子传输管：380℃
辅气温度：350℃

表2 组分名称、保留时间及特征离子一览表（*为定量离子）

五、实验结果

表3 兽残加标回收实验结果

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