牛血清蛋白(BSA)是一种从牛血清中提取的高纯度蛋白质,广泛应用于生物实验、诊断试剂制备和细胞培养等领域。其主要作用和用途包括:
用途
1、生化研究:BSA常用于生化实验中的各种反应,如酶切反应、蛋白质定量分析等。
2、细胞培养:BSA可以作为细胞培养基的成分,提供必要的营养和稳定的环境。
3、免疫诊断:在免疫诊断法中,BSA常被用作封闭剂,防止非特异性结合。
4、临床化学试剂:BSA在一些临床化学试剂中用作稳定剂或校准品。
5、蛋白质化学研究:BSA作为一种模型蛋白质,常用于研究蛋白质的结构和功能。
6、分子生物学实验室:BSA在分子生物学实验中常用于防止酶的失活和非特异性吸附。
性质
1、化学性质:BSA是一种稳定的蛋白质,但在强氧化剂和强酸的存在下可能会变性。需要冷藏保存。
2、物理性质:BSA是血液的主要成分之一,分子量约为66.430kDa,等电点为4.7。它由583个氨基酸残基组成,含有17个二硫键和一个自由巯基。
3、生物学性质:BSA具有多种生物学功能,如维持渗透压、pH缓冲、载体作用等。在细胞培养中,BSA可以提供必要的营养和保护作用。
具体应用
1、WesternBlot:BSA常作为封闭剂,防止抗体的非特异性结合。
2、酶切反应:在酶切反应缓冲液中加入BSA,可以提高酶的稳定性和活性。
3、PCR反应:在PCR体系中,BSA有助于Taq酶的稳定性和活性,从而提高PCR的效率。
4、细胞培养:BSA可以作为细胞培养基的成分,提供必要的营养和稳定的环境。
分级及选择
BSA有不同的等级,适用于不同的实验需求。常见的等级包括:
普通BSA:适用于一般的生化实验。
生物技术级BSA:适用于细胞培养和高灵敏度的免疫检测。
无脂肪酸BSA:适用于测定培养的组织细胞释放的游离脂肪酸浓度等。
无蛋白酶BSA:适用于放射免疫、酶联免疫等实验。
细胞培养级BSA:适用于细胞培养及相关实验。
储存条件和使用注意事项
长期保存:需置于-20℃,避免反复冻融。
短期使用:可4℃保存,稀释后溶液建议现配现用。
避免高温或强酸碱环境,防止变性失活。
实验前确认批次一致性,减少结果偏差。
操作时佩戴手套,防止引入蛋白酶污染
总之,牛血清白蛋白在生化实验和医学研究中具有广泛的用途,其稳定的性质和多功能的角色使其成为实验室中不可或缺的试剂。