Oligo(dT)25磁性微球是通过将生物素化Oligo(dT)25与链霉亲和素聚合物磁珠相结合而成，利用Oligo(dT)25与mRNA(poly(A)+RNA)的相互作用原理，可以直接从Total RNA、培养细胞、组织等中提取mRNA，并用作于下游分子生物学实验的模板，包括RT-PCR、Northern blot、cDNA文库构建、体外翻译等。

产品优势

• 1、粒径均一，单分散性良好；
• 2、非特异性吸附低，特异性高，提取的mRNA纯度高；
• 3、超顺磁性，磁含量高，可确保磁珠快速分离；
• 4、提取产物中的磁珠可以不用洗脱而直接进入下游的实验操作。

产品使用说明

• 1、缓冲液的准备
• 缓冲液可使用下列推荐 Buffer，也可根据自己的使用习惯配置不同的缓冲液体系，基本原理就是高盐结合，低盐洗脱。缓冲液需用 DEPC 水或 RNase-free 水进行配制。具体配置方法见表1。
• 表1 mRNA 捕获所需缓冲液及配方

• 2、样品准备
• 用 DEPC 水将 5~15µg Total RNA 水稀释至 50μl。可根据RNA浓度调整稀释体积，建议 50-90μl。
• 3、mRNA 捕获
• 1) 磁珠准备 将 Oligo(dT)25 Magpoly Beads 从 2-8℃冰箱取出，颠倒平衡 5-10min，充分悬浮磁珠，使用移液器吸取20µl 的磁珠悬浮液，置于离心管中，将离心管置于磁分离器上，待溶液变澄清后，用移液器吸弃上清液。
• 2) 磁珠平衡 将离心管磁分离器上取下来，加入 200µl Binding Buffer，混合混匀，将离心管置于磁分离器上，待溶液变澄清后，用移液器吸弃上清液，重复洗涤 2 次，将离心管磁分离器上取下来，用 50μl Binding Buffer 重新悬浮磁珠（Binding Buffer 重悬体积随样品体积进行调整，控制反应总体积在 100µl）。
• 3) 磁珠结合 mRNA 将样品加入到处理好的磁珠中，用移液器小心吹打混匀 5-10 次。将离心管置于 PCR 仪上，65℃ 5min，25℃ 5min，4℃ 5min。
• 4) 洗杂 将离心管置于磁分离器，待溶液变澄清后，用移液器吸弃上清液。向离心管中加入 200μl Wash Buffer，使用移液器反复吹打 5-10 次，将离心管置于磁分离器上，待溶液变澄清后，用移液器吸弃上清液，重复上述步骤 2 次。
• 5) 二次结合 向离心管中加入 50µl DEPC 水，使用移液器反复吹打 5-10 次。将离心管置于 PCR 仪上，80℃ 2min，20℃5min。反应结束后，向离心管中加入 50µl Binding Buffer，用移液器吹打混匀 5-10 次，室温静置 5min。
• 6) 二次洗杂 将离心管置于磁分离器，待溶液变澄清后，用移液器吸弃上清液。向离心管中加入 200μl Wash Buffer，使用移液器反复吹打 5-10 次，将离心管置于磁分离器上，待溶液变澄清后，用移液器吸弃上清液，确保上清液去除干净。
• 7) 洗脱 mRNA 可以根据需要改变洗脱体积从而达到调整mRNA 浓度的目的。建议用 10-20μl Elution Buffer 加入到离心管中，使用移液器轻轻吹打3-5 次，混匀，将离心管置于 PCR 仪上，80℃孵育2min，将离心管置于磁分离器上，待溶液变澄清后，用移液器吸取并保留上清液，即为 mRNA。
• 4、注意事项
• 1）使用本产品前，请仔细阅读产品说明书。
• 2）磁珠保存过程中应避免冷冻/干燥和高速离心等操作，否则会破坏磁珠的结构，严重影响蛋白结合能力。
• 3）在使用磁珠前，请温和的、充分的振荡，使磁珠保持均匀的悬浮状态。
• 4）使用过的磁珠重复使用时，建议纯化同一RNA 样本，纯化不同 RNA 样本时，建议使用新的磁珠，以避免交叉污染。

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