随着抗生素在水环境中的广泛检出，磺胺类抗生素和甲氧苄氨嘧啶作为典型的新型污染物，对生态环境和人类健康构成了潜在威胁。为了准确测定水质中这些目标化合物的含量，高效液相色谱-三重四极杆质谱法（HPLC-MS/MS）因其高灵敏度、高选择性和高准确性，成为目前最常用的检测方法之一。以下是对该方法的详细解析，包括样品前处理、净化、标准曲线制备、色谱条件及检测结果分析。

一、方法概述

本方法适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水和海水中18种磺胺类抗生素和甲氧苄氨嘧啶的测定。
二、样品前处理
1 样品处理
1.1样品采集
使用棕色玻璃瓶采集水样，样品在4℃下保存，24小时内完成前处理。
1.2样品过滤
使用0.45μm或0.22 μm的微孔滤膜过滤水样，去除悬浮颗粒物。
1.3pH调节
用二水合乙二胺四乙酸二钠溶液调节样品pH至4.0-7.0，以优化固相萃取效率。
2 样品净化（固相萃取）
2.1固相萃取柱活化
使用固相萃取柱，依次用10mL甲醇和10mL超纯水活化。
2.2样品加载
将过滤后的水样以10-15mL/min的流速通过固相萃取柱，富集目标化合物。
2.3洗涤
用甲酸-甲醇（溶液）、甲醇和6mL超纯水洗涤萃取柱，去除杂质。
2.4洗脱
用8mL甲醇洗脱目标化合物，收集洗脱液。
2.5浓缩
使用氮吹仪或将洗脱液浓缩至近干，甲醇（色谱纯）和水（1:1）定容，过0.22 μm滤膜后待测。
三、标准曲线制备
3.1标准储备液配制
分别称取18种磺胺类抗生素和甲氧苄氨嘧啶标准品，用甲醇溶解，配制成ρ=10μg/mL。的单标储备液。
3.2标准工作液配制
取一定量目标化合物标准使用液，用甲醇溶液配制至少5个浓度点的标准系列，质量浓度分别为2.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、50.0μg/L、100μg/L和200μg/L(此为参考浓度)，分别取1.0mL制备好的标准系列溶液于进样瓶中，加入50.0μL内标使用液混匀待测。
3.3标准曲线绘制
按照仪器参考条件，由低浓度到高浓度依次进样分析。
四 、分析检测的色谱条件
4.1 液相色谱条件
色谱柱：C18柱（15cm（柱长 ）× 2.1 mm（内径）× 2.7 μm（粒径））。
流动相：
A相：甲酸溶液。
B相：甲醇溶液。
梯度洗脱程序：
0min：5% B。
8min：50% B。
12 min：90% B。
18 min：90% B。
19 min：5% B。
24 min：5% B。
流速：0.3 mL/min。
柱温：35℃。
进样量：5 μL。
4.2 质谱条件
离子源：电喷雾电离源（ESI），正离子模式。
扫描模式：多反应监测（MRM）。
监测离子对：根据目标化合物的母离子和子离子设置MRM参数（见下表）。
五、检测结果分析
5.1定性分析
通过目标化合物的保留时间和离子丰度比例进行定性分析。
5.2定量分析
根据标准曲线计算目标化合物的浓度，采用外标法进行定量。
百灵威可供应检测“水质18 种磺胺类抗生素和甲氧苄氨嘧啶”的标准品、试剂，以及配套试剂耗材。

标准品

品名	CAS	货号
Sulfadiazine, 99%, reference material 磺胺嘧啶	68-35-9	907349
Sulfamethazine-d4, 98%, reference material 磺胺二甲嘧啶-d4	1020719-82-7	989590新
Sulfamonomethoxine, 97%, reference material 磺胺间甲氧嘧啶	1220-83-3	908544
Sulfameter, 98%, reference material 磺胺对甲氧嘧啶	651-06-9	972921新
Sulfaquinoxaline, 95%, reference material 磺胺喹噁啉	59-40-5	291027
Sulfachloropyridazine, 97%, reference material 磺胺氯哒嗪	80-32-0	367197
Sulfadimethoxine-D6, 98%, reference material 磺胺二甲氧嘧啶-D6	73068-02-7	796801新
Sulfamethoxypyridazine, 99%, reference material 磺胺甲氧哒嗪	80-35-3	974568
Sulfathiazole, 99%, reference material 磺胺噻唑	72-14-0	989129
Sulfapyridine, 99.5%, reference material 磺胺吡啶	144-83-2	949456

试剂

品名	CAS	货号
Methanol, 99.9%, HPLC/ACS 甲醇	67-56-1	116481 危化品
Acetonitrile, 99.9%, HPLC/ACS 乙腈	75-05-8	134752 危化品
Potassium dihydrogen phosphate, 99.5%, for analysis 磷酸二氢钾	7778-77-0	986107
n-Hexane, 95%, HPLC/ACS 正己烷	110-54-3	133516 危化品

耗材

品名	CAS	货号
Microporous membrane filters, CA, non-sterile, white, Ф47, 0.45μm, 50 pcs/pack 微孔滤膜	/	986357
Microporous membrane filters, CA, non-sterile, white, Ф50, 0.22μm, 50 pcs/pack 微孔滤膜	/	954596

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