分子生物学中重要工具酶——Taq DNA聚合酶
时间: 2024-10-17
作者: 百灵威
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Taq DNA聚合酶来自嗜热菌Thermusaquaticus，具高度热稳定性。该酶催化DNA的5'→3'合成，具有低5'→3'核酸外切酶活性，无可检测的3'→5'核酸外切酶(校对)活性，此外，该酶显示脱氧核苷酸转移酶活性，在PCR产物的3'末端添加额外的腺嘌呤。
有如下优势：
*注：在74℃， 30分钟内摄⼊10 nM的脱氧核苷 酸聚合成脱氧核酸的活性定为1个活性单位(U)。
2.反应条件(扩增1Kb的DNA⽚段的PCR反应条件)
分子生物学染料法qPCR Mix——超快延伸速度，特异性强
二氧化硅磁珠——分子诊断核酸提取的好选择
低电渗合成琼脂糖——极易溶解，一次微沸即可使用
常用核酸电泳染料对比
有如下优势：
- • 性能稳定，未检测出内切酶和外切活性；
- • 扩增得到的PCR产物3'端附有⼀个A，可直接克隆于T-Vector中。
产品列表
| 品名 | CAS | 货号 |
|---|---|---|
| Taq DNA polymerase, Mg2+ Taq DNA聚合酶 | / | 9372402 |
产品组分
| 组分/含量 | 1000U | 5000U |
|---|---|---|
| 10×PCR buffer(含Mg2+) | 1mL*1 | 1mL*5 |
| 5U/μL Taq酶 | 200μL*1 | 200μL*5 |
产品用途
⽤于DNA扩增。使用方法
1.PCR反应体系(20μL)| 成分名称 | 终浓度/用量 |
|---|---|
| 10×PCR buffer | 2μL |
| 25mM dNTP | 0.2μL |
| 引物1 | 0.3μM（终浓度） |
| 引物2 | 0.3μM（终浓度） |
| 模板 | 1ng |
| 5U/μL Taq酶 | 1μL |
| 去离子水 | 至20μL |
| 循环次数 | 反应步骤 | 温度（℃） | 时间 |
|---|---|---|---|
| / | 第一步 | 95 | 5min |
| 25 | 第二步 | 95 | 30s |
| 25 | 第三步 | 55（根据Tm值自行设置） | 30s |
| 25 | 第四步 | 72 | 1min |
| / | 第五步 | 72 | 10min |
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