Afatinib dimaleate, 99%, an irreversible EGFR family inhibitor
阿法替尼双马来酸盐 , 99% , 不可逆EGFR 家族抑制剂
产品编号
1648192
CAS
纯度
99%
分子式
C32H33ClFN5O11
分子量
718.10
品牌
J&K
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10MG
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250MG
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中文别名双马来酸盐阿法替尼

产品描述

Afatinib (BIBW2992) Dimaleate 不可逆地抑制 EGFR/HER2,包括 EGFR(wt),EGFR(L858R),EGFR(L858R/T790M) 和 HER2,IC50 分别为0.5 nM,0.4 nM,10 nM 和 14 nM;活性比对Gefitinib抵抗型L858R-T790M EGFR突变体高100倍。

靶点(IC50 & Targe)

EGFR (L858R),0.4nM

EGFR (L858R/T790M),10nM

EGFR (wt),0.5nM

HER2,14nM

体外研究

在表达野生型(H1666)或L858R/T790M (NCI-H1975) EGFR的肺癌细胞系中,Afatinib比erlotinib、gefitinib和lapatinib能够更有效的抑制细胞生长。Afatinib同样对表达HER2 776insV (NCI-H1781) 或EGFR E746_A750del (HCC827)的NSCLC细胞系有效,但对表达野生型EGFR 和HER2的A549细胞无效。[1] Afatinib可增强topotecan和mitoxantrone对SP细胞的细胞毒性,并增强topotecan和mitoxantrone对SP细胞的诱导凋亡作用。[1]

体内研究

在MDA-MB-453移植瘤模型中,Afatinib(20 mg/kg,口服给药)可显著诱导肿瘤衰退,累积治疗/对照肿瘤体积比(T/C比)为2%,并下调EGFR和AKT磷酸化水平。[1] 在A7、A431、FaDu、UT-SCC-14和UT-SCC-15移植瘤模型中,Afatinib(30 mg/kg,口服给药)可显著延长肿瘤生长时间。[3] 在HER2扩增移植瘤模型中,Afatinib(30 mg/kg,口服给药)可显著抑制肿瘤生长,并显著延长生存期。[4] 在HER2阳性胃癌NCI-N87移植瘤模型中,Afatinib(25 mg/kg)口服给药4天可显著减小肿瘤体积,给药21天几乎完全治愈肿瘤。[5]

激酶实验

体外激酶实验:

EGFR激酶:每100 μL酶反应体系含10 μl 溶于50% Me2SO的抑制剂,20 μL底物溶液(200Mm HEPES pH 7.4,50 mM乙酸镁,2.5 mg/mL聚(EY),5μg/mlbio-pEY)和20 μL酶。加入50μl 100 μM ATP(溶于10 mM MgCl2)开始酶促反应,室温下反应30分钟,加入50 μl终止液终止反应(250 mM EDTA溶于20 mM pH 7.4 HEPES)。吸取100 μL到链霉亲和素包被微孔中,室温温育60 min后,用200 μL/孔洗涤液(50 mM Tris,0.05% 吐温20)洗涤。每孔加入100 μL 250 ng/mL HRPO标记的anti-PY抗体(Py20H Anti-Ptyr:HRP)。反应60 min后,用200 μL洗涤液洗涤三次。加入100 μL TMB过氧化物酶溶液(A:B= 1:1)。反应10分钟后终止反应,ELISA检测器测定OD450 nm处吸光值。HER2-IC 酶:酶活性在50%Me2SO中,不同浓度的抑制剂存在或不存在下测定。每100μL酶反应体系和EGFR激酶检测体系类似,再加入1000 μM Na3VO4。在10mM醋酸镁中加入50 μL 500 μM ATP溶液开始酶促反应。酶需经过稀释,以含130 mM NaCl、0.05% Triton X-100、1 mM DTT和10% 甘油的20 mM pH 7.4 的HEPES稀释。室温反应30 min,加入50 μL终止液终止。Src激酶的测定:每100μL反应包含10 μL 含抑制剂的50% Me2SO,20 μL酶,20 μL 以1000 μM Na3VO4配置的底物。加入50 μL 1000 μM ATP溶液开始酶促反应。BIRK激酶测定:250 mM pH 7.4 Tris-HCl、10 mM DTT、2.5 mg/mL poly(EY)、5 mg/mL bio-pEY作为底物溶剂,加入由8 mM MnCl2和20 mM 醋酸镁配置的2 mM ATP开始酶促反应。VEGF2和HGFR 激酶实验:室温反应20 min,加入10 μL 5%磷酸终止。用96孔过滤收集板收集沉淀到GF/B过滤器中,经洗涤后,50℃干燥1 h,密封和结合放射性由闪烁计数用TopCount™或Microbeta b counter™检测放射性强度。

细胞实验

Cell lines: SP和NSP细胞系

Concentrations: 1 μM

Incubation Time: 48 h

Method: 采用MTT法测定细胞毒性。IC50值为导致50%细胞死亡的药物浓度。用Bliss法拟合剂量应答曲线和计算IC50值。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 负荷ARK2移植瘤的SCID小鼠

Formulation: DMSO

Dosages: 25 mg/kg

Administration: 口服给药

(Only for Reference)

参考文献

[1] D Li, et al. Oncogene. 2008, 27(34):4702-4711.

[2] Wang XK, et al. Cancer Res. 2014, 74(16):4431-4445.

[3] Gurtner K, et al. Radiat Oncol. 2014, 9:261.

[4] Schwab CL, et al. Br J Cancer. 2014, 111(9):1750-1756.

[5] Janjiqian YY, et al. J Nucl Med. 2013, 54(6):936-943.

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