Afatinib, 99%, inhibits EGFR/ErbB irreversibly
阿法替尼 , 99% , 不可逆抑制EGFR/ErbB
产品编号
1232626
CAS
纯度
99%
分子式
C24H25ClFN5O3
分子量
485.94
品牌
J&K
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英文别名BIBW 2992

产品描述

Afatinib (BIBW2992)不可逆地抑制EGFR/ErbB,包括EGFR(wt),EGFR(L858R),EGFR(L858R/T790M),ErbB2(HER2)和ErbB4(HER4),在无细胞试验中IC50分别为0.5 nM,0.4 nM,10 nM,14 nM和1 nM。

靶点(IC50 & Targe)

EGFR (L858R),0.4 nM (cell free)

EGFR (L858R/T790M),10 nM (cell free)

EGFR (wt),0.5 nM (cell free)

HER2,14 nM (cell free)

ErbB4,1 nM (cell free)

体外研究

BIBW2992不可逆地抑制EGFR/HER2,在体外作用于野生型EGFR ,L858R突变型EGFR, L858R/T790M 双突变型EGFR,及HER2时IC50分别为0.5, 0.4, 10, 14 nM。在体外实验中,BIBW2992不管作用于野生型EGFR/HER2还是突变型EGFR/HER2都显示出强大的活力,与gefitinib作用于L858R突变型EGFR的活力差不多,但是要比gefitinib 作用于L858R-T790M双突变型EGFR的活力大100倍。在体外,BIBW2992有效抑制所有实验类型细胞的EGFR/HER磷酸化作用。比如人类扁平上皮癌A431细胞系表达的野生型EGFR, 鼠类NIH-3T3细胞转染的野生型HER2 , 以及乳腺癌BT-474细胞系和胃癌NCI-N87细胞系表达的内源性HER2。[1]

体内研究

活体研究时按实验对象体重,每千克口服20 mg BIBW2992持续25天,肿瘤产生明显的衰退现象,通过肿瘤切片的免疫组织化学染色观察发现,EGFR和AKT的磷酸化作用收到抑制。因此,正如lapatinib和neratinib, BIBW2992是次代酪氨酸激酶抑制剂,不可逆地抑制人类EGFR2(HER2)和EGFR激酶。BIBW2992不仅能和原代酪氨酸激酶如erlotinib和gefitinib一样有效抑制EGFR突变型,而且还能作用于抗erlotinib和gefitinib的EGFR。[1]

激酶实验

体外激酶活性实验:

人类EGFR和L858R/T790M双重突变型EGFR 的酪氨酸激酶区域与谷胱甘肽巯基转移酶区域相接,提取酪氨酸激酶区域的方法见补充说明。在有和没有BIBW2992时分别测定酶活。使用杆状病毒系统克隆HER2激酶,用类似提取EGFR激酶域的方法提取HER2激酶域。

细胞实验

Cell lines: NSCLC细胞

Concentrations: 0-10 μM

Incubation Time: 1小时

Method:细胞按1×104密度转移到96孔板上,在无血清培养基上过夜培养,用于EGFR磷酸化实验。第二天添加包含BIBW2992的混合物,培养基在37oC温育1小时。在室温下用100 ng/ml EGF刺激10分钟。细胞用冰冻PBS冲洗,然后每孔用120 μl HEPEX buffer萃取,然后在室温下震荡1小时。每孔中所有2×104细胞都用于HER2磷酸化实验。在涂有链霉亲和素的板上加用封闭液按1:100比例稀释的抗EGFR的生物素和c-erb2/HER2肿瘤蛋白Ab-5-生物素。上述步骤得到的萃取物转移到有抗体包被的孔中,室温下温育1小时。彩色显影的测法见补充说明,吸光度为450纳米。

(Only for Reference)

动物实验

Animal Models: 雌性无胸腺NMRI-nu/nu鼠

Formulation: 0.5%甲基纤维素-0.4% Tween-80

Dosages: 20 mg/kg

Administration: 口服处理

(Only for Reference)

参考文献

[1] Li D, et al. Oncogene, 2008, 27(34), 4702-4711.

[2] Ferrarotto R, et al. Expert Opin Investig Drugs. 2014, 23(1):135

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